離子交換層析是利用生物樣品中多種組分因自身不同的電負(fù)性而與離子交換劑產(chǎn)生不同的結(jié)合力，并通過改變洗脫液的離子強(qiáng)度，改變各組分與離子交換劑的結(jié)合力，而達(dá)到分離純化的目的。一般常用梯度洗脫法，即在洗脫的過程中逐步、連續(xù)增大洗脫液的離子強(qiáng)度，依次將各組分洗脫下來。

　　

　　離子交換層析檢測儀與梯度混合器配合，可以產(chǎn)生離子強(qiáng)度呈線性梯度變化的洗脫液；在線檢測生物樣品隨洗脫液中離子強(qiáng)度改變的洗脫峰。通過改變線性梯度的斜率和其他一些條件，克服洗脫峰峰形過寬、拖尾和重疊現(xiàn)象，得到分辨率較好的分離效果。

　　

　　1、離子交換層析分為哪幾種？

　　離子交換層析可以根據(jù)配基的不同可以分為陽離子交換層析和陰離子交換層析。陽離子交換柱可以吸附帶正電荷的蛋白，陰離子交換柱可以吸附帶負(fù)電荷的蛋白。

　　

　　2、選陽離子還是陰離子？

　　蛋白是兩性分子，具有等電點(diǎn)PI。當(dāng)緩沖液的PH值低于蛋白等電點(diǎn)PI，蛋白帶正電，選陽離子交換柱；當(dāng)緩沖液的PH值高于蛋白等電點(diǎn)PI，蛋白帶負(fù)電，選陰離子交換柱。

　　

　　3、強(qiáng)和弱的區(qū)別？

　　強(qiáng)離子交換劑載量在很寬的PH范圍內(nèi)保持恒定，弱離子交換劑載量會隨著PH而變化。強(qiáng)離子交換劑，當(dāng)選擇性不夠好時(shí)，嘗試弱離子交換劑。

　　

　　4、如何選擇緩沖液PH值？

　　建議選擇PH6-8的中性緩沖液。可以使用和等電點(diǎn)相差1個(gè)PH的緩沖液作為初始嘗試，如果要達(dá)到最好分離效果，一般需要摸索PH條件。